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钙化性主动脉瓣疾病（calcific aortic valve disease，CAVD）是一种常见且临床后果严重的心脏瓣膜疾病，但其发病机制尚未完全明确。过往CAVD被认为是瓣膜退化和钙沉积导致的被动过程，现阶段研究发现其实是与生理性骨矿化相似的主动调节过程。主动脉瓣间质细胞（VIC）作为主动脉瓣中的主要细胞类型而起着关键作用，健康时处于静止状态，在病理条件下会引发一系列病变反应。重要的是，VIC向成骨样细胞转化是主动脉瓣钙化的基本特征。因此，将向成骨样细胞转化的VIC恢复为静止状态可能是减轻或逆转CAVD的有效手段。近年来，越来越多证据表明表观遗传学调控在CAVD的发展中至关重要，其中m6A甲基化修饰在CAVD中的功能尚未得到关注。

肠易激综合征（Irritable bowel syndrome，IBS）是一种慢性功能性消化道疾病，常持续性或间歇性地发作，其临床症状通常表现为结肠痉挛、慢性腹痛、腹胀和排便习惯的改变，包括腹泻、便秘或两者兼具，其中腹泻型肠易激综合征（Diarrheal irritable bowel syndrome，IBS-D）发病率较高。目前普遍认为IBS-D患者的发病与心理应激、家族遗传、胃肠道感染及饮食等因素密切相关，但上述因素之间对IBS-D发生的调控逻辑关系仍然缺乏系统全面的分析。在本研究中，作者阐明了免疫代谢紊乱、精神应激、菌群紊乱与结肠平滑肌收缩功能障碍之间的内在联系，为应激性内脏高敏感及平滑肌收缩亢进的个性化治疗提供了新思路。

在上一个主题中，我们从原理、应用、实验流程及常见问题几个方面详细了解了细胞迁移，侵袭，克隆形成技术，本期我们继续为大家带来细胞表型实验——血管生成实验的指南和常见问题解析。

在上一个主题中，我们从管形成机制，以及血管形成实验应用、实验流程、结果解读、常见问题几个方面详细介绍了血管形成实验，本期我们继续为大家带来细胞粘附实验的指南和常见问题解析。

血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell，VSMC）由收缩型向增生型转变是心血管疾病发生和发展过程中血管重构的基本病理生理改变。RNA修饰是调节基因表达的必要条件，N-乙酰基转移酶10 (N-acetyltransferase 10, NAT10)能够对mRNA进行N4-乙酰胞嘧啶(N4-acetylcytidine, ac4C)修饰，参与多种生理和病理过程，但在血管重构的生物学功能和潜在的调节机制方面仍不清楚

在前面的文章中我们介绍了与细胞运动有关的细胞迁移和侵袭实验，本期我们将目光聚焦于细胞的克隆形成方面，主要介绍细胞的克隆形成实验。克隆形成实验（Colony Formation Assay），也称为集落形成实验，是一种体外细胞生存能力的测定方法，关键在于检测单个细胞能否生长成包含至少50个细胞的克隆，以测试细胞群中每一个细胞无限分裂的潜能。此方法最初由Puck和Marcus于1956年提出，描述了一种评估单个哺乳动物细胞在培养皿中形成克隆或集落能力的细胞培养技术。克隆形成实验不仅是确定细胞对电离辐射生殖死亡的标准方法，也可用于评估其他细胞毒性剂的有效性。

小细胞肺癌（SCLC）占所有肺癌的13%-15%，是最致命的恶性肿瘤之一。尽管诊断和治疗方法不断进步，但由于患者对各种治疗药物迅速产生的耐药性，SCLC的预后仍然不容乐观。先前的研究已经发现lncRNA LYPLAL1-DT参与SCLC的肿瘤发生，但高表达的LYPLAL1-DT在SCLC化疗耐药中的具体作用和潜在机制仍未清楚。

在前面的文章中我们介绍了与细胞生长有关的细胞增殖和细胞凋亡实验，那么本期我们将目光聚焦于细胞的运动方面，主要介绍细胞迁移和侵袭实验。迁移和侵袭是细胞生物学中两个至关重要的过程，它们在胚胎发育、免疫反应、伤口愈合以及肿瘤转移等过程中发挥关键作用，探讨其中的机制对于基础研究和临床应用都具有重要意义。

2024年9月17日，河南中医药大学李建生团队和武汉大学张好建团队联合在《Cell Reports Medicine》（IF=11.7）上发表了题为“Lipolysis engages CD36 to promote ZBP1-mediated necroptosis-impairing lung regeneration in COPD”的研究论文。值得注意的是，在本研究中，作者使用了汉恒生物提供的AAV6.2FF-Cre和AAV6.2FF-shZBP1腺相关病毒，成功在CD36flox/flox小鼠肺组织中实现了CD36基因的敲除和在C57小鼠肺组织中实现ZBP1基因的敲低。

细胞功能实验是生物医学科研人的必备技能之一，旨在通过对细胞进行处理或操作，来研究细胞功能和相关生物学进程。细胞功能实验可以揭示细胞在特定条件下的功能和表型变化，主要体现在细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭、成管和黏附等过程。此外，还可借助细胞功能实验评估细胞对外界环境的应答和适应能力，以及研究疾病的发病机制、筛选药物靶点、评估药物毒性等，是探讨核心科学问题的重要手段。近期系列干货将对细胞功能性实验进行逐一和全面的介绍，本期先分享两个基础的功能性实验指标——细胞增殖和细胞凋亡，将从细胞增殖与凋亡的定义、细胞增殖与凋亡的检测以及细胞增殖与凋亡实验常见问题的解析三大主要方面拓展介绍。

前几期干货为大家介绍了基因/蛋白表达水平的调控及检测方法，本期小编将为大家继续介绍免疫荧光技术，具体包括免疫荧光的定义、免疫荧光的实验原理、免疫荧光的实验步骤、免疫荧光技术的应用和免疫荧光实验的常见问题及解析等五大方面。

胆汁酸（BAs）在脂溶性营养素的消化与吸收过程中扮演着关键角色，并作为信号分子参与调节机体的代谢平衡和能量稳态。胆汁酸稳态一旦失衡或其信号传导途径受到干扰，可能会引发胆汁淤积、肝胆损伤以及代谢性疾病。胆汁酸合成的精细调控主要依赖于肝脏和肠道中法尼酯X受体（FXR, NR1H4）的活化，该受体能够感应胆汁酸水平的变化，并调控一系列与胆汁酸合成、转化、转运和信号传递相关的基因表达。以往的研究发现，在餐后肠内胆汁酸增加的情况下，激活的FXR可促进肝脏中小异二聚体伴侣（small heterodimer partner，SHP）、v-maf鸡肌腱神经纤维肉瘤癌基因同源物G（v-maf avian musculoaponeurotic fibrosarcoma oncogene homolog G，MAFG）以及回肠中成纤维细胞生长因子15/19 (fibroblast growth factor 15，FGF15/19)的转录。肠道分泌的FGF15/19选择性地结合并激活肝成纤维细胞生长因子受体4（FGFR4）-β-klotho（KLB）复合体，并以尚未解析的信号路径抑制胆汁酸关键合成酶基因Cyp7a1和Cyp8b1的转录。这种内分泌途径与食物消化的生理反应相结合，在餐后阻止新的胆汁酸合成，是防止过量胆汁酸对肝脏和肠道系统产生潜在毒性的必要生理需求。由于回肠与肝脏分离，而肝脏是胆汁酸合成的主要器官，因此，回肠FGF15/19通路的功能滞后于肝脏在早期餐后胆汁酸合成中的作用。这种时空限制提出了一个关键问题：当内分泌FGF15/19信号通路尚未发挥作用时，肝内胆汁酸合成以及总胆汁酸含量是如何在肝脏中受到控制的？

质粒“plasmid”一词由约书亚·莱德伯格(Joshua Lederberg)于1952年提出，被定义为染色体外遗传元件1。得益于其易用性、自我复制、稳定性，质粒已是现代生命科学研究中不可或缺的工具，无论是在基础研究还是转化应用领域，质粒的身影都随处可见，因此作为一个合格的生命科学科研人，质粒构建是一个非常基础的傍身技能。今天小编将带大家探一探质粒构建的玄机，后面几期内容大家还将陆续看细胞质粒转染、qpcr/wb检测基因表达等精彩内容。

实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR ，RT-qPCR) 是一种研究基因表达极为准确和灵敏的方法。在外源基因导入到靶细胞后，如何确定外源基因在靶细胞的表达情况呢？WB和RT-qPCR检测是非常好的选择。在前两期的干货中我们已经介绍了载体构建和质粒转染的基本操作，本期小恒将向大家详细介绍如何用RT-qPCR检测目的基因的表达水平。RT-qPCR是一种对特定DNA进行定量分析的方法，其原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行荧光定量PCR，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，以此对模板进行定量。在实时PCR扩增过程中，荧光信号被收集，转化为成为扩增和熔解曲线。那么首先我们来看几个基本概念：基线，荧光阈值和Ct值。

上一期内容介绍了如何构建质粒，然而成功构建质粒只是踏出了基因表达调控的第一步，要成功调控基因表达，还需要将质粒高效的递送到细胞内。本期小编将向大家介绍如何将质粒转染进宿主细胞。广义上讲，转染是利用病毒感染以外的方式人工将核酸（DNA或RNA）导入细胞的过程。经过转染后，导入的核酸游离在细胞核中，可转录表达而不进行复制，也有极小部分会整合到受体细胞的基因组中，随宿主基因组一同复制。作为最常见的转染载体，质粒DNA含有重组基因和调控元件，可以转染到细胞中，用于基因表达调控，研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说，除了合适的载体，转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。

胰腺导管腺癌（PDAC）是最致命的恶性肿瘤之一，大多数患者在被诊断出时病情已至晚期，化疗是晚期PDAC的主要治疗策略。白蛋白结合型紫杉醇联合吉西他滨方案（AG方案）是胰腺癌的主要化疗方案，而原发性耐药极大影响了AG方案的效果。经典的PI3K/Akt通路是多种肿瘤相关信号通路中的核心通路，异常激活可大大促进PDAC的化疗耐药性，使用靶向该通路的抑制剂组合是提高患者化疗敏感性的潜在策略。然而，众多化疗联合PI3K/Akt通路抑制剂治疗策略所显示出的治疗有效性和安全性仍然十分有限，探索安全可靠的PI3K/Akt通路抑制剂对于提高PDAC化疗敏感性非常重要

2024年9月，中山大学王菲、暨南大学肖佳、安徽医科大学王华团队合作在《Cell Metabolism》（IF=27.7）上发表了题为“Myeloid beta-arrestin 2 depletion attenuates metabolic dysfunction-associated steatohepatitis via the metabolic reprogramming of macrophages（髓系β-arrestin 2缺失通过巨噬细胞的代谢重编程减轻代谢功能障碍相关的脂肪性肝炎）”的研究论文。研究中使用了汉恒生物提供的AAV8-TBG-miR30-shArrb2来敲低肝细胞中的Arrb2，研究其是否可以防止饮食诱导的代谢功能障碍相关性脂肪性肝炎（MASH）。

肝纤维化和肝硬化是全球重大健康问题，目前依旧无法治愈，即使是肝移植也存在较大的风险和局限性，因此迫切需要开发新的治疗策略。近年来，巨噬细胞疗法和CAR-T细胞疗法逐渐崭露头角，前者可归巢至肝脏，调节肝脏免疫微环境并缓解肝纤维化、促进肝再生、改善肝功能；后者可识别并清除表达衰老标志物尿激酶纤溶酶原激活受体（uPAR）的肝星状细胞（HSC）（当发生慢性肝损伤时，HSC会被激活并转变为肌成纤维细胞，同时分泌大量细胞外基质（ECM）促进肝纤维化），进而减轻模型小鼠的肝纤维化。为了进一步开发特异性、疗效更高的细胞疗法，本研究结合两种方法的优势，用特异性CAR对巨噬细胞进行改造，评估其在肝纤维化模型中的有效性和安全性，旨在为肝纤维化的治疗开辟新途径。

上一期干货为大家介绍了外周神经特异性基因调控策略，本期将继续带大家了解骨骼组织特异性基因调控策略，主要从骨骼组织特性及组成、骨骼嗜性AAV血清型、骨骼特异性启动子和病毒递送到骨骼的方法等方面展开分享。

上期干货我们介绍了腺相关病毒在皮肤中的特异性基因调控策略，本期我们将系统介绍腺相关病毒在外周神经研究中的特异性调控策略，主要从组织特性及组成、嗜性AAV血清型、特异性启动子和病毒递送到外周神经的方法等四个方面展开分享。