小恒这就来支招，帮你避雷。

首先：确认你的细胞是否适合用慢病毒感染

虽然说慢病毒适用于大部分细胞系，例如肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞等，但也有一些细胞并不适用，这需要事先查阅文献，或咨询汉恒的技术人员，也可以申请病毒的试用装进行测试。

第二：确认收到的病毒活性

也就是要确保慢病毒进行了正确的存储和稀释。慢病毒是存储在-80℃的，如果计划在收到慢病毒的一周内就使用，也可放在4°C保存；解冻病毒一定要在冰上进行，避免反复冻融，有必要可以先进行分装。如果病毒存储不当或反复冻融会降低病毒滴度/活性，-80℃保存半年以上需要重新测滴度。

第三：维持良好的细胞状态及感染前合适的细胞接种量

良好的细胞状态，是一切实验开始的前提。如果遇到支原体或是其他污染，影响了细胞状态，则会大大影响其感染效率。在进行针对性的防治后再开始感染实验。

感染时的细胞密度过高或者过低都会影响感染效率，根据细胞增殖的速度调整细胞接种量，以保证在感染后3天左右细胞刚好快长满培养皿底部为宜。

 

• 针对大部分细胞系：传代周期在2~3天，感染时细胞铺板的密度保持在30~50%左右

• 针对某些原代细胞：由于细胞增长缓慢，可以在接种时提高汇合度到70~80%左右

• 针对非分裂细胞：如神经元细胞，接种后不再增殖，此时可以按照100%的汇合度进行接种。

第四：正式感染先预实验，进行MOI的摸索

MOI（MultiplicityofInfection，感染复数）是指每个细胞感染的病毒数，通常MOI越高，病毒整合到染色体的数量以及目的蛋白的表达量越高。

举个例子，取MOI=3、10、30、100，根据操作说明，将换算好体积的病毒液加入细胞中。

每孔加病毒量（µl）=MOI*细胞数/滴度（TU/ml）×1000

感染3-4天后，观察荧光表达情况，通过细胞感染效果，确认目的细胞的感染条件和感染参数。

第五：加助转染试剂

以上的问题都避雷了，那最简单的方法就是可以加入助转染试剂polybrene来提升效率。

Polybrene是带正电的小分子，与细胞表面的阴离子结合， 通常加入polybrene能提高感染效率10~30%。但要注意Polybrene有一定的细胞毒性，有的细胞对Polybrene的毒理反应明显，因此细胞是否适合Polybrene需要摸索。

第六：对于一些难感染细胞的感染方法

如果你的细胞本身难以感染，例如悬浮细胞，可使用平角离心转染法（低速（200´g）离心1h，然后放入培养箱中正常培养即可）。若由于实验条件有限，没有平角离心机，可用离心管代替。

其他一些较难感染的细胞可进行二次感染（即感染24h后，更换新鲜病毒进行二次感染），可显著提升感染效率。