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动物活体基因调控全攻略(组织特异性 AAV 及血清型推荐)

人阅读 发布时间:2020-11-10 17:08

说起生物医药科研界的让人撕心裂肺的实验,动物实验肯定是其中一大块。裸鼠成瘤,各种疾病造(zuo)模(nie),让我们饱尝与鼠小弟的相爱相杀。

既然有牺牲,除了有尊严,还得有价值。如何让鼠小弟们的牺牲换来的数据逼格更高?自然少不了时下最火爆的动物体内基因转染技术,腺相关病毒(AAV)安全性高、免疫原性低,相对于基因工程小鼠成本低,周期短,风险小,非常适合用于活体动物的基因转导,并且AAV具有多血清型,可以靶向感染不同的组织器官,根据汉恒生物的多年经验汇总了不同组织器官的AAV血清型,注射方式,用量推荐。

汉恒多脏器AAV注射方式及注意点:
 

注射部位 汉恒推荐的血清型 注射方式 动物 注射体积( ul) 备注
心脏 AAV9 原位多点注射(局部) 大鼠 10-15/点,5 个点 心肌主要有系统性给药、原位给药和冠脉给药法,最常用的是前两种,冠脉法技术难度大,较少用。
**如需提高心肌特异性,您可配合使用汉恒筛选的心肌特异性启动子。
小鼠 10-15/点,3-5 个点
尾静脉注射(系统性) 大鼠 250(200g 体重)
小鼠 100
肝脏 AAV8 尾静脉注射 大鼠 200(200g 体重) 大多数病毒都有嗜肝性,因此肝脏也是所有脏器中最好感染的。肝脏也可以用门静脉注射,感染效果更好。
但门静脉注射需行动物手术,技术复杂且易造成创伤。
**如需提高肝脏特异性,您可配合使用汉恒筛选的肝脏特异性启动子。
AAV9 小鼠 100
全脑 AAV-BBB 尾静脉注射 大鼠 250-300 特殊血清型,可跨血脑屏障,感染全脑。
但经过汉恒验证,目前该血清型只适合大小鼠,在猴子上不成功。
**如需提高神经细胞特异性,您可配合使用汉恒筛选的神经特异性启动子,如 pSyn,pCamKII,pGFAP 等。
小鼠 100
大脑(局部) AAV9,AAV2,AAV5 立体定位注射 大鼠 1-5ul 经汉恒验证,AAV9 型感染扩散范围广,AAV2 次之,AAV5 扩散范围最小最集中。
**如需提高神经细胞特异性,您可配合使用汉恒筛选的神经特异性启动子,如 pSyn,pCamKII,pGFAP 等。
小鼠 0.2-2ul
脊髓 AAV5;
AAV1;AAV9
鞘内注射 大鼠 5-10ul 针头要足够细,找准椎骨之间空隙入针,避免损伤神经。
注射一定要缓慢,且控制好注射体积。
小鼠
脂肪 汉恒脂肪特异性血清型 腹内脂肪-腹腔注射 大鼠 300 汉恒实验室自验证的脂肪特异性血清型
小鼠 150-200
皮下脂肪-原位注射 大鼠 10-15/点,5-8 个点
小鼠 10-15/点,5-8 个点
骨骼肌 9型 原位多点注射 大鼠 10-15/点,3-5 个点 下针缓慢,注意深度
小鼠 10-15/点,3-5 个点
眼睛 汉恒 AAV 视网膜专用型 玻璃体腔注射 大鼠 3~5ul 汉恒实验室自验证的视网膜特异性血清型
小鼠 1-2ul
AAV-DJ 视网膜下腔注射 大鼠 3~5ul
小鼠 1-2ul
肺脏 汉恒肺脏特异血清型 无创气管注射 大鼠 100-200ul(200g 体重) 需呼吸机。汉恒也测试过滴鼻法,效果不如气管注射
小鼠 50-75
肾脏 2型或9型 肾脏肾盂原位注射 小鼠 100ul 较为复杂,方法详见汉恒公众号实验视频
肠道 1型或5型 灌肠 大鼠 1000ul(200g 体重) 动物需要提前饥饿,排空肠道。病毒用量非常大
小鼠 500ul
血管(内皮为主) 1型或5型 腹主动脉局部感染 大鼠 50ul 局部感染 30 分钟,感染时需要 clamped 肾主动脉


除了不同的血清型靶向感染动物组织外,汉恒生物还研发了特异性启动子和特异性血清型,可实现动物活体的基因精准定向递送



in vivo基因转导的工具小恒帮您搞定了,然而多脏器注射对操作的要求高,稍有不慎,鼠弟归天数据报销。不过贴心的小恒已经准备了史上最全的动物实验注射视频,为您的动物实验保驾护航!

想要查看全部注射视频,请至汉恒公众号-微官网-实验视频


 

不单单是 AAV,其他的 drug,particle 的注射方式也如出一撤,只要你需要做到动物实验,汉恒动物实验视频一定会对你有所帮助。建议大家关注汉恒公众号,随时查看汉恒实验视频。

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