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又双叒是Cell，AAV助力肝纤维化研究
人阅读 发布时间：2019-10-30 11:02
2019年8月29日，南方医科大学丁彦青及周伟杰共同通讯在Cell在线发表题为“LECT2, a Ligand for Tie1, Plays a Crucial Role in Liver Fibrogenesis”的研究论文，揭示了LECT2表达水平与肝纤维化分期有关;提示与临床相关的血清LECT2水平可作为肝纤维化的潜在诊断标志物，而靶向LECT2/Tie1信号通路可能为该肝病的治疗提供新的途径。（文章链接见文末
而在本篇文章中，利用的腺相关病毒（AAV）载体，在活体水平对LECT2基因进行干扰，正是来自于汉恒生物。
文章导读
肝纤维化是在数百万肝病患者中非常常见的病症，慢性肝病（CLD）患者最常出现反复肝损伤，肝纤维化等生理变化。肝纤维化会导致肝硬化，这是全球最常见的死亡原因之一。但由于分子发病机制的特征不明确，尚无有效的治疗方法。 白细胞衍生的趋化因子2（LECT2）是一种16kDa的分泌蛋白，最初被鉴定为中性粒细胞的趋化因子，可刺激软骨细胞和成骨细胞的生长。然而，LECT2在肝纤维化发展中的作用及其潜在机制仍然很不清楚。
肝硬化患者中LECT2的临床意义
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接下来，作者在临床肝硬化样本中检测了LECT2与Alb (肝细胞标记物)、CD31(内皮细胞标记物)、a-SMA(活化的肝星状细胞[HSCs]标记物)和CD11b(巨噬细胞标记物)的共定位，证实了LECT2主要由肝实质细胞和内皮细胞分泌。并在CCl4诱导的小鼠肝纤维化动物模型中也证实了这一点。体外实验则证明转化生长因子b1 (TGF-b1)可上调野生型小鼠中分离的原代内皮细胞对LECT2的分泌。 为了证明LECT2可以促进肝纤维化，作者首先观察了正常小鼠和CCl4诱导的肝纤维化小鼠的肝脏中LECT2的表达水平，发现LECT2在肝纤维化小鼠的门静脉区域和肝损伤边界表达量显著增加，且血清LECT2可升高6-7倍。为了进一步验证，作者通过慢病毒载体在小鼠体内过表达LECT2（LV-LECT2），导致肝纤维化的加重。而在敲除了LECT2的小鼠模型中，CCl4诱导产生的肝纤维化也被显著降低，而LV-LECT2可以重新加重肝纤维化水平。作者在这些实验中注意到了LECT2能诱导纤维化因子a-SMA,TGF-b1, ET1, interleukin (IL)-33, FN1, IL-11, and COL4等的分泌量增加。
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作者探讨了LECT2影响肝纤维化发展的机制，由于在肝纤维化过程中血管生成扮演着重要角色，所以作者推测LECT2通过影响内皮细胞的成管和迁移而促进肝纤维化。为了验证这一猜想，作者针对LECT2设计了siRNA序列，在细胞水平证明了LECT2抑制了内皮细胞的成管和迁移。在动物实验中，作者则通过LV-LECT2过表达载体和LECT2敲除小鼠模型证明LECT2具有抗血管生成的作用。同时作者还观察到LECT2可以促进肝窦毛细血管化。
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接下来作者探讨了LECT2调控EC功能的机制。以前有报道称孤儿EC受体Tie1是LECT2的候选受体，所以作者通过免疫共沉淀法、交联-质谱联用技术(XL-MS)以及对Tie1和LECT2蛋白的截断和改造，证实了LECT2与Tie1的Ig3区域结合，抑制内皮细胞成管和迁移。
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作者通过进一步实验证实在与Tie1结合后，LECT2中断Tie1 / Tie2异二聚化，促进Tie2 / Tie2同源二聚化，激活PPAR信号传导，并抑制内皮细胞的迁移和管形成。
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由于AAV系统已经在临床证明了其安全性，所以作者在汉恒生物构建了AAV9-LECT2 shRNA和对照组的AAV9-control shRNA，通过尾静脉注射到C57BL/6大鼠中，注射CCL4诱导肝脏纤维化，观察到AAV9-LECT2 shRNA组的大鼠LECT2表达水平明显下降，肝纤维化水平明显降低，纤维化因子在mRNA表达水平明显减少，肝门静脉血管生成增加和血窦毛细血管化减少。该研究结果证明，LECT2的抑制对于肝纤维化的治疗具有潜在的意义。（小伙伴们发现了么，AAV的在体实验，能够证明研究结果对于未来的临床应用具有实际意义。也是发高分文章的利器哦）
总而言之，本研究报道了关于LECT2 / Tie1信号传导在肝纤维化发病机制中的重要作用及其潜在机制的新发现。靶向LECT2 / Tie1信号传导可能代表肝纤维化的潜在治疗靶标，并且血清LECT2水平可能是筛选和诊断肝纤维化的潜在生物标志物。
通讯作者介绍
丁彦青教授，博士生导师，南方医科大学基础医学院病理学系/南方医院病理科主任，国家二级教授/博士研究生导师。长期从事结直肠癌转移分子机制研究， 主持及完成国家基金重点项目、国家“863”课题、“973”分题、中德合作及省部级研究课题40余项，发表SCI收录论文70余篇（包括Gastroenterology、Gut、CellRes、Clin Cancer Res、J Pathol、JProteomics Res等杂志），获广东省丁颖科技奖及国家级、省部级及中华医学会科技进步奖一、二等奖共9项。
周伟杰教授，2003年于山东大学生命科学院获学士学位，2010年于中科院上海生化细胞所获博士学位，2011-2015年于美国密歇根大学生物材料系从事博士后研究工作，2015年回国至今任南方医科大学基础医学院病理学系教授、博师生导师。获得2015年广东省杰出青年基金支持，入选第十二批国家青年千人计划。在Nature、Cell Research、Oncotarget等杂志发表第一作者或通讯作者论文。提出了成体干细胞诱导与放化疗联合治疗肿瘤的新方案。主要从事肿瘤的发生机制与治疗方法研究和干细胞促进组织损伤修复与再生的机制及应用研究。文章链接：https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(19)30786-X
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