汉恒生物科技(上海)有限公司 品牌商

10 年

手机商铺

商家活跃:
产品热度:
品牌商

汉恒生物科技(上海)有限公司

入驻年限:10 年

  • 联系人:

    技术支持

  • 所在地区:

    上海

  • 业务范围:

    试剂、技术服务

  • 经营模式:

    生产厂商 科研机构

在线沟通

公司新闻/正文

稳转系构建血泪史

人阅读 发布时间:2019-12-06 10:35

实验中很多情况下我们都要用到稳定细胞系
但质粒建系时间长,成功率低
很多时候耗时半年还不见成效
眼看别人实验都收尾了,自己这边却还没有动静
耗在上面的时间精力足够写一篇血泪史!
是不是好想唱一句:时(tou)间(fa)都去哪儿啦~


但是现在不用担心!
今天我们就来聊一聊什么情况下要稳定建系并且用什么方法稳定建系更好


稳定转染,即进入细胞的质粒整合入细胞基因组中,并能随细胞分裂稳定传递下去。这是相对瞬时转染而言的。

瞬时转染的表达时间短暂,外源基因导入整合基因组的几率非常低,绝大部分以游离形式存在,不能随细胞分裂而一同复制,导致最后拷贝数被稀释,无法达到持续表达外源基因的目的。一般用转染试剂进行质粒转染,多为瞬时转染。

 

那么在什么情况下我们需要构建稳定株呢?


1. 一般如下情况需要构建稳定株


• 长期在目的细胞中研究基因功能,通过构建稳定株,可以大大降低频繁转染或者病毒包装的成本,也极大方便实验研究;
• 部分蛋白半衰期极长,瞬时 RNA 只能干扰表达,无法去除已经表达的目的蛋白,通过构建稳定株可以实现更好的基因干扰效果
• 瞬转往往会引入极高拷贝数的表达,导致因为人为因素造成实验结果的不精确,构建稳定株可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究;
• 需要用诱导表达系统的,主要是一些致死基因或者是需要时空表达的;
• 需要用细胞做动物实验的,比如裸鼠成瘤等,往往需要构建成稳转株。


2. 构建稳定株的方法

其实用脂质体转染、磷酸钙转染法等理论上是可以构建稳定株的,但这些方法整合入基因组的效率极低,很难成功。而慢病毒可以携带外源基因随机整合进基因组,效率很高,是建立稳定株的最优方式。
 


3. 构建稳定株的注意点

稳定株构建是个长期过程,从质粒构建到慢病毒包装,再到细胞感染及后期的筛选,每一步都至关重要,所以建立稳转株花个半年时间,也是常有的事,而且要承担病毒包装不成功,细胞感染效率低等风险。

所以,想要短期内高效构建出稳定细胞株,就不要错过汉恒提供的「三严」稳转株构建服务

▴ 种子优良--  严  选低代数细胞来源,无支原体无黑胶虫;

    汉恒生物所有的细胞均从中科院细胞库购买,代数低无污染,可提供 STR 检测报告

▴ 性状稳定--  严  酷的筛选及靶基因表达验证体系;

    汉恒生物所有的稳转株都采用 RT-qPCR 验证,保证表达水平

▴ 活力无损--  严  格的建系后连续 3 代细胞增殖活力评价

上一篇

提升RNA干扰效率的几个重点

下一篇

一张图概括自噬研究

更多资讯

询价列表

暂时没有已询价产品

inquiry icon 快捷询价
    当你希望让更多商家联系你时,可以勾选后发送询价,平台会将你的询价消息推荐给更多商家。
    个人名片

    编辑个人名片

    编辑
    yanxuan

    关注「丁香通研选」

    微信及时获得商家回复,

    获得更多交易信息和保障。